液氮罐(guàn)內樣品(pǐn)莫名汙(wū)染(rǎn)？4個關(guān)鍵排(pái)查點(diǎn)與清潔方(fāng)案
實驗室(shì)或醫療機構在使(shǐ)用液氮罐存儲細胞，試(shì)劑等樣品時(shí)，偶爾(ěr)會(huì)遇到“樣(yàng)品(pǐn)解凍(dòng)後發(fā)現汙染”的問(wèn)題(tí)——細(xì)胞出現(xiàn)異常增(zēng)殖(zhí)，試劑(jì)渾濁(zhuó)，排查(chá)後(hòu)發現其他環節無(wú)問題(tí)，終鎖定是液(yè)氮(dàn)罐(guàn)內汙(wū)染導致。這種情(qíng)況不(bù)僅浪費樣品，還可能(néng)影(yǐng)響實驗或(huò)診療結(jié)果(guǒ)，其實隻要找(zhǎo)準(zhǔn)汙染(rǎn)源頭(tóu)，做(zuò)好清潔維(wéi)護，就能有效(xiào)避(bì)免。
若(ruò)液氮罐長(cháng)期未清(qīng)潔，罐(guàn)內會殘(cán)留(liú)樣(yàng)品碎(suì)屑(xiè)，凍(dòng)存管(guǎn)破(pò)裂後的(dí)試劑(jì)殘留(liú)，這些(xiē)雜質在液(yè)氮(dàn)汽化(huà)過(guò)程(chéng)中會附著(zhuó)在罐(guàn)壁或樣品(pǐn)表麵(miàn)，隨(suí)著(zhuó)時間推移(yí)滋生細(xì)菌(jūn)，黴菌(jūn)；另(lìng)外(wài)，若之(zhī)前存(cún)儲過汙染(rǎn)樣品(pǐn)，未(wèi)徹(chè)底清(qīng)潔(jié)就繼續(xù)使用，也(yě)會(huì)導(dǎo)致交(jiāo)叉(chā)汙染。
清潔步(bù)驟(zhòu)：
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先將罐內(nèi)剩餘液氮排空（注意在(zài)通風(fēng)良好(hǎo)的室外(wài)操(cāo)作(zuò)，避(bì)免(miǎn)液氮汽(qì)化(huà)導(dǎo)致缺(quē)氧(yǎng)），待罐體(tǐ)恢復至(zhì)常溫（通常需(xū)要(yào)
24-48 小時(shí)，不要用加熱設(shè)備加速(sù)升溫，避(bì)免(miǎn)損壞(huài)內(nèi)膽）；
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用幹(gān)淨的(dí)軟(ruǎn)布蘸取
75% 醫用酒(jiǔ)精(jīng)，擦拭罐內(nèi)壁，罐口，密(mì)封(fēng)蓋內側(cè)（重點(diǎn)清潔角落(là)和(hé)接(jiē)縫處(chǔ)，這(zhè)些地方容易殘(cán)留(liú)雜質(zhì)）；
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若(ruò)罐內有(yǒu)頑固(gù)汙漬（如幹涸(hé)的試(shì)劑(jì)殘(cán)留），可用軟毛(máo)刷(shuā)（刷毛要(yào)軟(ruǎn)，避免(miǎn)劃(huá)傷內膽）蘸取酒(jiǔ)精(jīng)輕(qīng)輕(qīng)刷洗，刷(shuā)洗(xǐ)後(hòu)用(yòng)幹(gān)布擦(cā)幹；
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清潔完成後，將罐體敞口放置在(zài)通風處(chǔ)，讓酒精完全揮(huī)發（約(yuē)
2-3 小時），再檢查罐內是否有殘留水分或汙漬，確認幹淨後才能(néng)重新充裝(zhuāng)液氮。
清(qīng)潔周(zhōu)期：普通存(cún)儲場景（存(cún)儲(chǔ)常規樣品(pǐn)）每
3 個月(yuè)清(qīng)潔 1 次(cì)；若(ruò)存(cún)儲易汙(wū)染樣品（如生(shēng)物活性(xìng)樣品），每月(yuè)清潔 1 次(cì)；若發(fā)現有(yǒu)凍存管(guǎn)破裂，立(lì)即排(pái)空液氮(dàn)並清潔罐(guàn)體(tǐ)。
取樣(yàng)用(yòng)的鑷(niè)子(zǐ)，凍存管架，手套(tào)等(děng)工(gōng)具(jù)若未徹底消(xiāo)毒，會攜帶(dài)細菌(jūn)，病毒或雜質，每次伸入(rù)罐內取放(fàng)樣(yàng)品時，這些汙染物(wù)會落在(zài)罐內(nèi)或(huò)樣品(pǐn)表(biǎo)麵(miàn)，導(dǎo)致(zhì)汙染(rǎn)。比(bǐ)如用(yòng)未消毒的鑷子(zǐ)夾取細(xì)胞凍存(cún)管，鑷子(zǐ)上的(dí)細菌會隨(suí)凍(dòng)存管進(jìn)入液氮(dàn)，解凍(dòng)後(hòu)細(xì)菌(jūn)復蘇，導(dǎo)致細胞汙染。
消毒規範(fàn)：
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金屬工具（鑷(niè)子，凍(dòng)存(cún)管架）：每(měi)次(cì)使用(yòng)前用(yòng)高(gāo)壓(yā)蒸(zhēng)汽滅(miè)菌(jūn)（121℃，103kPa，滅菌(jūn)
20 分鐘），或(huò)用醫(yī)用(yòng)酒精浸泡 30 分鐘(zhōng)後(hòu)晾(liàng)幹(gān)（注(zhù)意(yì)酒精(jīng)濃度不(bù)可(kě)過高，75% 酒精(jīng)消(xiāo)毒效(xiào)果）；
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手套：使(shǐ)用一(yī)次性無菌(jūn)手套，每次操(cāo)作前更換(huàn)，若(ruò)手(shǒu)套(tào)接(jiē)觸(chù)過外部環境，立即更換新手套；
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樣(yàng)品容(róng)器(qì)（凍存管，試(shì)劑瓶）：存儲前(qián)檢(jiǎn)查(chá)是否有破損，漏液(yè)，確保密(mì)封完(wán)好(hǎo)，且容器外壁(bì)需用酒(jiǔ)精(jīng)擦(cā)拭消(xiāo)毒(dú)，避免外壁(bì)攜(xié)帶汙(wū)染物。
液(yè)氮罐的密(mì)封(fēng)蓋若(ruò)出(chū)現(xiàn)密(mì)封圈(quān)老化，蓋體變形，會(huì)導(dǎo)致密(mì)封不(bù)嚴(yán)，外(wài)界的灰(huī)塵，細菌(jūn)，濕(shī)氣(qì)會(huì)通過縫隙(xì)滲入(rù)罐內，汙染液(yè)氮和樣(yàng)品(pǐn)；尤其(qí)是(shì)在潮濕環境下，滲入的(dí)濕(shī)氣(qì)會在罐(guàn)內(nèi)結(jié)冰，解凍(dòng)後(hòu)會滋生細(xì)菌。
排(pái)查(chá)與修復(fù)：
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每周(zhōu)檢(jiǎn)查(chá)密封(fēng)蓋：觀(guān)察密封圈(quān)是否有裂紋(wén)，變(biàn)硬，變(biàn)形，若有則(zé)立(lì)即(jí)更(gēng)換(huàn)同型(xíng)號(hào)耐低(dī)溫密封圈（建議選用(yòng)矽橡膠(jiāo)材質，耐低溫
- 60℃以(yǐ)下(xià)，且不易(yì)老(lǎo)化）；
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檢(jiǎn)查蓋體(tǐ)是(shì)否變(biàn)形(xíng)：將密(mì)封蓋(gài)扣在(zài)罐(guàn)口，觀察是(shì)否有(yǒu)縫隙，若(ruò)蓋體變形(xíng)，可聯(lián)係(xì)廠(chǎng)家更換蓋體(tǐ)，或在(zài)蓋(gài)體與(yǔ)罐口接觸(chù)處(chǔ)加(jiā)一(yī)層耐(nài)低溫密封墊（厚(hòu)度
1-2mm），增(zēng)強密封性；
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每次(cì)關閉密(mì)封(fēng)蓋時，確保(bǎo)蓋體扣(kòu)緊(jǐn)，避免未扣嚴導致密封(fēng)失(shī)效。
若(ruò)充裝(zhuāng)的液(yè)氮(dàn)純度(dù)不(bù)足(zú)，含有灰塵，水分或(huò)其他(tā)雜(zá)質，這(zhè)些雜(zá)質會隨著(zhuó)液(yè)氮進入(rù)罐內(nèi)，附著在樣品表(biǎo)麵(miàn)，導(dǎo)致(zhì)汙染。比如(rú)使用(yòng)工業液(yè)氮（純(chún)度
99.9% 以下）存儲生(shēng)物樣品，其(qí)中的(dí)雜(zá)質會影響(xiǎng)樣品活性(xìng)，甚至導(dǎo)致(zhì)汙染。
選(xuǎn)型(xíng)與充(chōng)裝建議(yì)：
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根據存(cún)儲樣(yàng)品選擇液氮純(chún)度：存儲(chǔ)生物細(xì)胞(bāo)，試劑(jì)等(děng)敏感(gǎn)樣品，需選用(yòng)醫用(yòng)或實(shí)驗室液氮（純(chún)度(dù)≥99.999%）；存儲普通(tōng)金(jīn)屬(shǔ)樣(yàng)品(pǐn)，可(kě)選用(yòng)工業液氮，但也(yě)要(yào)確保(bǎo)純(chún)度≥99.9%；
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選擇(zé)正規(guī)供應商(shāng)：充裝(zhuāng)前(qián)確認(rèn)供(gōng)應(yīng)商(shāng)資質，要求(qiú)提(tí)供(gōng)液氮(dàn)純度檢(jiǎn)測(cè)報告，避(bì)免(miǎn)購(gòu)買劣(liè)質(zhì)液氮；
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充(chōng)裝時(shí)注(zhù)意(yì)衛(wèi)生(shēng)：充裝用的軟管(guǎn)每(měi)次(cì)使用前用(yòng)酒精(jīng)消毒，避(bì)免(miǎn)軟(ruǎn)管內殘留(liú)雜質汙(wū)染液(yè)氮；充裝(zhuāng)過(guò)程(chéng)中不(bù)要(yào)讓軟管觸碰地麵或其(qí)他汙染物。
清(qīng)潔維(wéi)護(hù)後(hòu)，建議定期抽檢罐(guàn)內(nèi)樣(yàng)品（如(rú)每(měi) 1 個月取 1-2
個(gè)備用樣(yàng)品(pǐn)解凍檢(jiǎn)測），觀(guān)察(chá)樣品是否有汙染跡象(xiàng)；同(tóng)時(shí)記錄(lù)每次清潔(jié)時(shí)間，液(yè)氮(dàn)充(chōng)裝情(qíng)況，樣(yàng)品存儲種(zhǒng)類，通過數據對比及時(shí)發現汙染(rǎn)隱(yǐn)患，確保樣品(pǐn)存儲(chǔ)安(ān)全。
